九州酷游

7月20日，九州酷游疫苗副总裁兼首席研究官张凡、九州酷游丽凡达总经理彭育才等在《npj Vaccines》上发表了题为“Safety and efficacy assessment of an mRNA rabies vaccine in dogs, rodents, and cynomolgus macaques”的研究论文。进一步研究了mRNA狂犬疫苗LVRNA001在犬和小鼠中的保护效力，并使用不同剂量在食蟹猴、小鼠和大鼠中进行了系统的安全性评估。数据表明：LVRNA001仅需两针，即可提供100%安全有效的免疫保护。这为推进人用狂犬病mRNA疫苗的下一阶段研究奠定了坚实基础。

仅需两针，提供100%保护率

在本研究中，团队首先测试了LVRNA001在犬体内的保护效力。在感染致死剂量的RABV之前，犬用10 μg或50 μg LVRNA001免疫接种2次（D0-7免疫方案）。对照组犬接种3次（D0-7-21免疫方案）人用剂量的灭活疫苗或PBS。所有犬在第35天接受50倍LD50（半数致死量）的街毒BD06毒株攻毒（图1a）。

 
图1：犬模型LVRNA001暴露前和暴露后免疫保护效果

结果显示，高剂量和低剂量LVRNA001及灭活疫苗组的存活率为100%，而PBS组的存活率为0%（图1b）。所有接种疫苗组在D7、D9、D11、D35和D125都可检测到高水平的中和抗体，均高于WHO建议的中和抗体保护阈值0.5 IU/mL（图1c）。最为重要的是，LVRNA001疫苗接种组在D125上保持了比灭活疫苗组更高的中和抗体滴度（图1c），表明与灭活疫苗相比，LVRNA001疫苗接种会产生更强更持久的免疫保护反应。

接下来继续评估了狂犬病毒暴露后的疫苗效力，四组犬均先通过肌肉注射感染50倍LD50毒力RABV-BD06毒株。病毒感染6小时后，接种LVRNA001（10或 50 μg，D0-7），另外接种五针法人用剂量的灭活疫苗（D0-3-7-14-28）作为阳性对照，PBS作为阴性对照（图1d）。接种后90天存活率数据显示，接种两次10或50 μg LVRNA001和五剂灭活疫苗的犬存活率为100%，而所有接受PBS的犬都死亡（图1e）。 暴露后接种疫苗三个月后，与灭活疫苗组相比，mRNA高/低剂量组检测到的中和抗体水平相对较高（图1f）。

在小鼠体内，与按照五针法接种的灭活疫苗相比，接种两剂的LVRNA001诱导的中和抗体水平明显更高（图2c）。值得关注的是，LVRNA001高剂量组可在首次免疫后第5天使小鼠血清阳转率达到100%，并可使小鼠更快产生高于0.5 IU/mL的保护性中和抗体（图2c）。这表明LVRNA001可以刺激小鼠以比灭活疫苗更快的速度产生更高水平的中和抗体， 对于严重的暴露后处置尤为重要，可在狂犬病病毒到达神经中枢之前更有效的截杀病毒。

图2：小鼠模型接种方案探索

随后进行的小鼠暴露前免疫保护效力结果表明，注射1剂LVRNA001就可对攻毒小鼠提供100%的保护。暴露后以不同免疫程序（D0-7或D0-14）注射2剂的高剂量LVRNA001可为攻毒小鼠提供理想的保护效果，对中国七个种群狂犬病病毒代表株攻毒（中国I-VII株：SC16、GD1、NM3、QH2、LY、YN3和XZ17。为了能区分不同疫苗、不同接种程序的保护率，九州酷游设置的攻毒剂量远高于常规攻毒剂量的要求，以免出现保护率都是100%的情况）的平均保护率分别达到了85.71%和88.57%。与之相比，五针法灭活疫苗高剂量组的保护率仅为52.8%（图3）。

 

图3. 小鼠模型LVRNA001暴露前和暴露后免疫保护效果

LVRNA001可在食蟹猴中引起强大的免疫原性反应，同时保持相对安全的特征

据论文，本项研究确认了不同剂量的LVRNA001对犬和小鼠致死剂量RABV的保护效果，并分别评估了LVRNA001在食蟹猴和大鼠中重复剂量引起慢性毒性和生殖毒性的安全性。研究表明，LVRNA001可以在食蟹猴中引起强大的免疫原性反应，同时保持相对安全的特征。

 

图.  LVRNA001在食蟹猴中具有高度免疫原性

安全性评估是研究性新药（IND）申请的强制性要求，多项研究结果表明，LVRNA001在对小鼠的急性毒性研究中，单次给药LVRNA001（10或50 μg）不会引起明显的毒性反应。对食蟹猴的重复给药毒性研究也表明，低剂量和高剂量都具有良好的耐受性。

该疫苗在食蟹猴的AST、ALT和ALP水平没有引起显著变化，表明重复给药LVRNA001不会改变肝细胞的功能和代谢。然而，重复给药LNP和LNP-mRNA在5周的重复给药期间会引起炎症，导致FIB、CRP和A/G比值等标志物发生显著变化。FIB和CRP作为炎症标志物通常因炎症而升高。据报道，CRP是急性期反应的一部分，其中许多血浆蛋白合成上调，而少量血浆蛋白合成（尤其是白蛋白）下调。这些变化在恢复4周后消失，提示仅在注射部位存在短暂的注射相关炎症反应。

T细胞免疫反应，特别是Th1偏向的免疫反应，对于从中枢神经系统中消除RABV病毒很重要。对食蟹猴的研究表明，T细胞反应与IFN-γ分泌细胞的产生呈Th1极化，表明对食蟹猴反复给药LVRNA001不会引起全身毒性，同时产生针对狂犬病病毒的强烈特异性T细胞免疫反应。同时，大鼠生殖毒性研究表明，LVRNA001给药不会影响怀孕的大鼠或其子代，也不会产生生殖或发育毒性。

图.  食蟹猴模型生化评估和淋巴细胞亚群检测

总之，mRNA狂犬疫苗LVRNA001可以更快产生更高水平的中和抗体并提供体内保护，表明LVRNA001是狂犬病的有利候选疫苗。